Dag 4
Nu har du
gjort både PCR och Southern. Syftet med bägge metoderna var att ta reda på om
LL 37-genen fanns i plasmiden. Jämför resultatet och diskutera för-och
nackdelar med metoderna.
Resultatet för PCR visade att LL37 fanns i plasmiden (se tidigare inlägg).
Southern visade också att genen var med eftersom band uppstog på membranet. På membranet syns enbart molekyler som proben bundit till och proben är komplementär till LL37-genen. De prober som bundit ospecifikt tvättades bort i stringenstvätten.
Fördelen med PCR är att den inte tar så lång tid som Southern. Men i PCR skulle en gen av nästan samma storlek som LL37 kunna ha amplifierats och då fått oss att tro att rätt gen är med fast det i själva verket är en annan lika stor gen. Southern är mer noggran eftersom proben binder till en specifik sekvens av DNA och ingen annan.
Vad tycker
du är det viktigaste som du har lärt dig under laborationen?
Jag har fått öva på laborativt arbete, noggranhet i pipettering, hantering av apparater, lösningar och enzymer och fått mer praktisk erfarenhet av hur arbetet planeras och genomförs.
Hej Maria bra skrivet. Jag har en fråga angående ditt påstående
SvaraRadera"Men i PCR skulle en gen av nästan samma storlek som LL37 kunna ha amplifierats och då fått oss att tro att rätt gen är med fast det i själva verket är en annan lika stor gen."
hur skulle detta gå till, jag tänker på att du har ju specefika primers till LL-37 hur stor är då chansen att just de primersna binder till en annan gen på samma avstånd som du själv har valt ut. själv tror jag att denna sannolikhet är extremt.
Hm.. det har jag inget bra svar på. Helt ärligt så glömde jag att primrarna binder och det gör att genen amplifieras. Tänke att genen på nått magiskt sätt amplifieras bara den kommer ner i PCR-maskinen. Hjärnsläpp...
SvaraRadera