Dag 1

Dag 1

Idag har du renat en rekombinant plasmid från en bakteriesuspension.

Vilka föroreningar har du förhoppningsvis tagit bort?

Proteiner, celldelar/cellrester, kromosomalt DNA, RNA.

Vad vet du om resultatet? Fick du ren plasmid?

Genom att undersöka plasidlösningens absorbans (A) vid olika våglängder kan DNAkoncentration och kontaminering av protein i lösningen beräknas.

A 260nm: 0,074

A 280nm: 0,042

Kvoten A260/A280 = 1,76

Kvoter under 1,8 indikerar kontamination av protein. Värden mellan 1,6 - 2,0 är acceptabla och jag är nöjd med mitt resultat trots att plasmiden alltså inte är helt ren.

Så svaret blir nej, inte helt ren plasmid. Men så gott som!

Koncentrationen av DNA beräknades också av absorbansen vid 260nm och vi bevisade att det faktist finns plasmid i lösningen.

Är det något du funderar på som du vill att vi tar upp vid genomgång nästa labdag eller vid labuppföljningen?

Om vi hade haft högre kontaminering av protein och inte varit nöjda med reningen, skulle vi då ha kunnat rena om plasmiden på något sätt eller är det bara att kasta och börja om?

Hur stor är sannolikheten att vi laboranter har kontaminerat plasmidlösningen, att protein kommer utifrån och inte är gamla celldelar som inte renades bort? Skulle det i så fall visa sig i absorbansmätningen? Eller blir det för små mängder?